This site uses cookies.
Some of these cookies are essential to the operation of the site,
while others help to improve your experience by providing insights into how the site is being used.
For more information, please see the ProZ.com privacy policy.
Aug 20, 2019 (posted viaProZ.com): Working on improving financial literacy and getting over my math-phobia. There's statistics formulas to go with things like standard deviations, capital market lines, IPOs, volatility, regression lines, betas and risk pooling ;)...more, + 1 other entry »
This person has a SecurePRO™ card. Because this person is not a ProZ.com Plus subscriber, to view his or her SecurePRO™ card you must be a ProZ.com Business member or Plus subscriber.
Affiliazioni
This person is not affiliated with any business or Blue Board record at ProZ.com.
Da Inglese a Greco - Tariffa standard: 0.08 EUR a parola Da Greco a Inglese - Tariffa standard: 0.08 EUR a parola Da Francese a Greco - Tariffa standard: 0.10 EUR a parola Da Greco a Francese - Tariffa standard: 0.10 EUR a parola Da Finlandese a Greco - Tariffa standard: 0.14 EUR a parola
Da Spagnolo a Greco - Tariffa standard: 0.09 EUR a parola Da Russo a Greco - Tariffa standard: 0.10 EUR a parola / 30 EUR all'ora Da Italiano a Greco - Tariffa standard: 0.10 EUR a parola / 30 EUR all'ora
The molecular chaperone HSP90 is an essential protein in eukaryotic cells. It interacts with more than 300 proteins, and regulates the physiological function in the cell [1] [2] . HSP90 interacts with a cancer, and the inhibitor of HSP90 is expected as an anticancer agent. 17-(Dimethylaminoethylamino)-17-demethox- ygeldanamycin (17-DMAG) is one of the HSP90 inhibitors, and it inhibits the ATPase activity of HSP90. We reported that cisplatin, one of the anticancer agents, mainly binds to the C-terminal and also the N-terminal domain of HSP90 and inhibits the chaperon activity [3] [4].The aryl hydrocarbon receptor (AhR) is the ligand-dependent transcriptional regulator that mediates the toxic effects of chemicals such as 2, 3, 7, 8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD), 3-methylcholanthrene (3-MC), and β-naphthoflavone (β-NF). It forms a complex with HSP90, co-chaperone p23, and the hepatitis B virus X-associated protein XAP2 in the cytoplasm [5] - [10]. After binding of a ligand, AhR is translocated into the nucleus and forms a complex with Arnt (AhR nuclear translocator). The AhR/Arnt heterodimer binds to the xenobiotic responsible element (XRE) and promotes the transcription of cytochrome P450 1A1 (CYP1A1), one of the xenobiotic metabolizing enzymes. Ligands of AhR cause toxicological effects, such as suppression of the immune response, impairment of reproduction, and promotion of carcinogenesis [11] [12]. AhR is composed of the basic helix-loop-helix (bHLH) domain and Per-Arnt- Sim homology (PAS) domain. The bHLH domain is a motif participating in DNA binding, HSP90 binding, and dimerization. The PAS domain is a ligand binding domain. It is made from PAS-A and PAS-B, and HSP90 binds to the PAS-B. The glutamine (Q)-rich region is near the carboxyl-terminal of AhR [10]. Purification of the full-length AhR is difficult, and there are few studies that analyzed the direct interaction of HSP90 and AhR. Thus, we purified the AhR-PAS and AhR-bHLH domain, and analyzed the direct interaction of HSP90 and the AhR-PAS or AhR-bHLH domain in vitro.Cisplatin (cis-Diamineplatium (II) dichloride) is a widely used antineoplastic drug for clinical cures. Cisplatin possesses the ability to bind DNA and inhibits the replication of DNA, resulted in the inhibition of tumor cell growth. Previously, we found that cisplatin directly binds HSP90 and inhibits its aggregation prevention activity in vitro [3] . Cisplatin inhibits glucocorticoid receptor-dependent and androgen receptor-dependent transcriptional activities in a dose-dependent manner in human cultured cells [13]. Inhibition of the HSP90 functions by cisplatin is considered to occur in vivo as well as in vitro. There is no report against the influence of cisplatin to AhR-HSP90 complex. We investigated the influence of cisplatin on the association or dissociation of AhR from HSP90-cochaperone complex.
2. Materials and Methods
2.1. Chemicals
7-(Dimethylaminoethylamino)-17-demethoxygeldamaysin as the inhibitor of HSP90 was purchased from Invitrogen (San Diego, U.S.A.). cis- Diamineplatium (II) dichloride as the inhibitor of HSP90 was purchased from SIGMA-ALDRICH (U.S.A.). Isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside (IPTG) was purchased from NakaraiTesque. 3-Methylcholanthrene, and Dimethylsulfoxide (DMSO) from SIGMA; MG132 from PEPTIDE INSTITUTE.
2.2. Antibodies
An antibody against AhR and β-actin were from Thermo Fisher Scientific (catalogue no; MA1-513). The rabbit polyclonal antibodies against HSP90, XAP2, and p23 were previously described [3] [9] [10].
2.3. Cell Culture
The human cervical cancer cell line, HeLa cells were cultured in Dullbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM; SIGMA) with 10% fetal bovine serum (Equitech-Bio), 20 μg/ml streptomycin, and 20 unit/ml penicillin (GIBCO) at 37˚C and 5% CO2. For MG132 treatment, 20,000 cells were plated in 96 well E-plate and their growth was monitored for 24 h. Cells were treated with 50 μM cisplatin for 16 hr and 50 μM of MG132 was added for 1 h and fresh media was added following washing once with media.
2.4. Cell Viability
AssayCells were cultured in 96-well plates at a density of 2500 per well in 100 μl of medium 24 hrs before addition of cisplatin. Cisplatin was added in concentrations of 0 - 100 μM. To assess cell viability, 10 μl of MTT solution (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (SIGMA) 5 mg/ml in PBS (phosphate buffered saline (-)) was added after a 16 hrs exposure to cisplatin. After a 4 h incubation, medium was removed and precipitates were lysed with 0.04 N HCl in 2-propanol. Then, absorbance was measured using a plate reader (Infinite F200, Tecan) at 595 nm.
2.5. Cell Treatment
HeLa cells were trypsinized and harvested in 35-mm dishes at a density of 1.5 × 105 cells, allowed to adhere for 24 hrs. Then, cells were treated by addition of 2 ml fresh DMEM containing samples at desired concentrations in DMSO. The cells were incubated in a certain time at 37˚C and 5% CO2.
2.6. Immunoblotting
Cells were rinsed three times with cold PBS, and collected using cell scraper (iwaki). The cell lysates were centrifuged at 2000 rpm at 4˚C for 5 min. The supernatants were removed and then lysed in lysis buffer (50 mM HEPES-NaOH, 5% Glycerol, 1% NP-40, 5 mM EDTA, 100 mMNaCl, 1 mM PMSF). After 10min incubation on ice, the lysates were centrifuged at 15,000 rpm at 4˚C for 15 min and then the supernatants were used. Total protein concentrations of supernatants were determined by using BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific). Cellular proteins were separated by 7% (for AhR and HSP90) and 13% (for XAP2 and p23) sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDE-PAGE), transferred onto PVDF membranes (BIO-RAD). Membranes were blocked by 3% skim milk in TBS for 1 h at room temperature and proved with specific primary antibodies overnight at room temperature. AhR diluted 1:1000, β-actin diluted 1:3000, HSP90 diluted 1:1000, XAP2 diluted 1:500, p23 diluted 1:3000. Washing was twice for 5 min and membranes were proved with the secondary antibody for 1 h at room temperature. Anti-Rabbit IgG (whole molecule)-Alkaline Phosphatase against AhR, HSP90, XAP2, and p23 was diluted 1:2000. Anti-Mouse IgG (whole molecule)-Alkaline Phosphatase against β-actin was diluted 1:3000. Washing was twice for 5 min and membranes were detected by labeling with alkaline phosphatase. The protein contents were quantified using Image J software (Drop of Wisdom).
2.7. Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)
Total RNA was isolated from cells using RNeasy Mini Kit (Qiagen). First strand complementary DNA (cDNA) was synthesized from 4 μg of total RNA with Super Script III First-Strand (Invitrogen), and cDNAs were amplified with the following primers: CYP1A1 (forward, 5’-ACCACCAAGAACTGCTTAGCC-3’; reverse, 5’-GAAGAGTGTCGGAAG-3’), β-actin (forward, 5’-GCTCGTCGTCGA CAACGGCTC-3’; reverse, 5’-CAAACATGATCTGGGTCATCTTCTC-3’). β-actin (forward, 5’-GCTCGTCGTCGACAACGGCTC-3’; reverse, 5’-CAAACA TGATCTGGGTCATCTTCTC-3’). The PCR products were separated in 1% agarose gels and stained with ethidium bromide. The CYP1A1/β-actin ratio was quantified using Image J software (Drop of Wisdom).
Traduzione - Greco Η Σισπλατίνη ως Αναστολέας της Ενεργοποίησης του AhR
Η μοριακή συνοδός HSP90 είναι μια στοιχειώδης πρωτεΐνη που βρίσκεται στα ευκαρυωτικά κύτταρα. Αλληλεπιδρά με περισσότερες από 300 πρωτεΐνες και ρυθμίζει τις οργανικές λειτουργίες στο κύτταρο [1] [2]. Η HSP90 αλληλεπιδρά με τον καρκίνο, και οι αναστολείς της HSP90 θεωρούνται ως αντικαρκινικοί παράγοντες. Ένας από τους αναστολείς της HSP90 είναι η 17-διμεθυλαμινο-αιθυλαμινο-17-διμεθοξυτζελνταναμυκίνη (17-DMAG), η οποία αναστέλλει τη δράση της ΑΤPάσης της HSP90. Συμπεράναμε ότι η σισπλατίνη, ένας από τους αντικαρκινικούς παράγοντες, συνδέεται κυρίως με το C-άκρο αλλά και το N-άκρο της πρωτεΐνης HSP90 και αναστέλλει τη δράση της μοριακού συνοδού [3] [4]. Ο υποδοχέας αρυλ-υδρογονανθράκων (AhR) είναι ο μεταγραφικός ρυθμιστής που εξαρτάται από τα προσδέματα και περιορίζει την τοξική δράση χημικών όπως η 2,3,7,8-τετραχλωροδιβενζο-p-διοξίνη (2,3,7,8-TCDD), το 3-μεθυλοχολανθρένιο (3-MC) και η β-ναφθοφλαβόνη (β-NF). Δημιουργεί σύμπλοκο με την πρωτεΐνη HSP90, τη συν-συνοδό p23 και την πρωτεΐνη XAP2 (hepatitis B virus X-associated protein XAP2) στο κυτταρόπλασμα [5] – [10]. Μετά τη σύνδεση με ένα πρόσδεμα, ο AhR εισέρχεται στον πυρήνα και δημιουργεί σύμπλοκο με τον πυρηνικό μεταφορέα του υποδοχέα των αρυλ-υδρογονανθράκων (Arnt). Το ετεροδιμερές AhR/Arnt συνδέεται με το στοιχείο απόκρισης σε ξενοβιοτικές (xenobiotic responsible element (XRE)) και προωθεί τη μεταγραφή του κυτοχρώματος P450 1A1 (CYP1A1), ενός από τα ένζυμα που μεταβολίζουν ξενοβιοτικές ουσίες. Τα προσδέματα του AhR έχουν τοξικολογικές επιδράσεις, όπως καταστολή της ανοσολογικής απόκρισης, εξασθένηση της αναπαραγωγικής ικανότητας και προώθηση της καρκινογένεσης [11] [12]. Ο AhR αποτελείται από τη βασική δομή έλικα-βρόχος-έλικα (bHLH) και την περιοχή Per-Arnt-Sim (PAS). Η περιοχή bHLH είναι μια δομή που συμμετάσχει στη δέσμευση του DNA και της HSP90 και το διμερισμό. Η PAS είναι περιοχή σύνδεσης με προσδέματα. Αποτελείται από τις PAS-A και PAS-B, και η HSP90 συνδέεται με την PAS-B. Η περιοχή πλούσια σε γλουταμίνη (Q) είναι κοντά στο καρβοξυλικό άκρο του AhR [10]. Ο καθαρισμός του AhR σε όλο το μήκος του είναι δύσκολος, και υπάρχουν ελάχιστες έρευνες που αναλύουν την άμεση αλληλεπίδραση της HSP90 και του AhR. Επομένως, καθαρίσαμε τις περιοχές AhR-PAS και AhR-bHLH και αναλύσαμε την άμεση αλληλεπίδραση της HSP90 με τη μια ή την άλλη in vitro. Η σισπλατίνη [cis-διαμμινοδιχλωρολευκόχρυσος(ΙΙ)] είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο αντινεοπλασματικό φάρμακο που χρησιμοποιείται για κλινική ίαση. Η σισπλατίνη δεσμεύει το DNA και αναστέλλει την αντιγραφή του, αναστέλλοντας έτσι την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων. Προηγουμένως βρήκαμε ότι η σισπλατίνη δεσμεύει άμεσα την HSP90 και αναστέλλει τη δράση της ως προς την πρόληψη συσσώρευσης in vitro [3]. Η σισπλατίνη αναστέλλει την μεταγραφική δραστηριότητα που εξαρτάται από υποδοχείς γλυκοκορτικοειδών και ανδρογόνων με τρόπο ανάλογο προς τη δοσολογία σε καλλιεργημένα ανθρώπινα κύτταρα [13]. Η αναστολή των λειτουργιών της HSP90 από την σισπλατίνη θεωρείται ότι λαμβάνει χώρα τόσο in vitro όσο και in vivo. Δεν υπάρχει αναφορά κατά της επίδρασης της σισπλατίνης στο σύμπλοκο AhR-HSP90. Ερευνήσαμε την επίδραση της σισπλατίνης στην σύνθεση ή διάσταση του AhR με το σύμπλοκο HSP90 – συν-συνοδός.
2. Υλικά και Μέθοδοι
2.1. Χημικά
Την 17-διμεθυλαμινο-αιθυλαμινο-17-διμεθοξυτζελνταναμυκίνη ως αναστολέα της HSP90 προμηθευτήκαμε από την Invitrogen (Σαν Ντιέγκο, Η.Π.Α.). Τον cis-διαμμινοδιχλωρολευκόχρυσο(ΙΙ) ως αναστολέα της HSP90 προμηθευτήκαμε από τη SIGMA-ALDRICH (Η.Π.Α.). Ισοπροπυλο-1-θειο-β-D-γαλακτοπυρανοζίτη (IPTG) προμηθευτήκαμε από τη NakaraiTesque. To 3-μεθυλοχολανθρένιο και το διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) προμηθευτήκαμε από τη SIGMA και το MG132 από την PEPTIDE INSTITUTE.
2.2. Αντισώματα
Ένα αντίσωμα κατά του AhR και της β-ακτίνης προμηθευτήκαμε από τη Thermo Fisher Scientific (κατάλογος ν. MA1-513). Τα πολυκλωνικά αντισώματα κουνελιών κατά των HSP90, XAP2, και p23 περιγράφηκαν προηγουμένως [3] [9] [10].
2.3. Κυτταροκαλλιέργεια
Καλλιεργήθηκε η ανθρώπινη κυτταρική σειρά καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, τα κύτταρα HeLa, σε τροποποιημένο θρεπτικό υλικό Dulbecco (Dullbecco’s modified Eagle’s medium) (DMEM; SIGMA) με 10% βόειο εμβρυϊκό ορό (Equitech-Bio), 20 μg/ml στρεπτομυκίνη και 20 μονάδες/ml πενικιλλίνη (GIBCO) στους 37˚C και με 5% CO2. Για τη χορήγηση MG132, 20.000 κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων E-plate και η ανάπτυξή τους παρακολουθήθηκε για 24 ώρες. Στα κύτταρα χορηγήθηκαν 50 μM σισπλατίνη για 16 ώρες και προστέθηκαν 50 μM MG132 για 1 ώρα, ενώ προστέθηκε νέο θρεπτικό υλικό μετά από μια έκπλυση με αυτό.
2.4. Κυτταρική Βιωσιμότητα
Κύτταρα δοκιμής καλλιεργήθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 2500 ανά φρεάτιο σε 100 μl υλικού για 24 ώρες πριν την χορήγηση σισπλατίνης. Η σισπλατίνη χορηγήθηκε σε συγκεντρώσεις 0-100 μΜ. Για να εκτιμηθεί η βιωσιμότητα των κυττάρων, 10 μl διαλύματος MTT (Βρωμιούχο μπλε θειαζολ-τετραζολίου (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) (SIGMA)) 5 mg/ml σε PBS (ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών ιόντων (-)) προστέθηκε μετά από 16 ώρες έκθεσης σε σισπλατίνη. Μετά από επώαση για 4 ώρες, το υλικό αφαιρέθηκε και τα ιζήματα υπέστησαν λύση με 0.04 N HCl σε 2-προπανόλη. Έπειτα μετρήθηκε η απορροφητικότητα χρησιμοποιώντας μια συσκευή ανάγνωσης πλακών (Infinite F200, Tecan) στα 595 nm.
2.5. Επεξεργασία Κυττάρων
Στα κύτταρα HeLa προστέθηκε θρυψίνη και η συλλογή τους έγινε σε δισκία 35-mm με πυκνότητα κυττάρων 1.5 × 105, αφού αφέθηκαν να προσκολληθούν για 24 ώρες. Έπειτα στα κύτταρα χορηγήθηκαν 2 ml φρέσκου διαλύματος DMEM που περιείχε δείγματα στις επιθυμητές συγκεντρώσεις σε DMSO. Τα κύτταρα επωάστηκαν σε συγκεκριμένο χρονικό διάστημα στους 37˚C και με 5% CO2.
2.6. Ανοσοστύπωση
Τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με κρύο διάλυμα PBS και συλλέχθηκαν με ξέστρο κυττάρων (Ιwaki). Τα λύματα κυττάρων υπέστησαν φυγοκέντρηση στους 2000 rpm στους 4˚C για 5 λεπτά. Τα υπερκείμενα αφαιρέθηκαν και υπέστησαν λύση σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (50 mM HEPES-NaOH, 5% Γλυκερίνη, 1% NP-40, 5 mM EDTA, 100 mMNaCl, 1 mM PMSF). Μετά από 10 λεπτά επώασης σε πάγο, τα λύματα υποβλήθηκαν σε φυγοκέντρηση στους 15,000 rpm στους 4˚C για 15 λεπτά και έπειτα χρησιμοποιήθηκαν τα υπερκείμενα. Η συνολική περιεκτικότητα των υπερκείμενων σε πρωτεΐνη υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το σετ δοκιμασίας πρωτεϊνών BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific). Οι κυτταρικές πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν από 7% (για τον AhR και τη HSP90) και 13% (για την XAP2 και p23) ηλεκτροφόρηση σε πηκτή πολυακρυλαμιδίου-SDS (sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDE-PAGE)) και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (BIO-RAD). Στις μεμβράνες προστέθηκε ως παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα 3% αποκορυφωμένο γάλα σε TBS για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και έπειτα χορηγήθηκαν ολονυχτίς συγκεκριμένα κύρια αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι συντελεστές αραίωσης ήταν ως εξής: AhR 1:1000, β-ακτίνη 1:3000, HSP90 1:1000, XAP2 1:500, p23 1:3000. Η έκπλυση πραγματοποιήθηκε δύο φορές για 5 λεπτά και στις μεμβράνες χορηγήθηκε το δευτερεύον αντίσωμα για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου.
Ο συντελεστής αραίωσης για τα αντισώματα κουνελιού αντι-IgG (πλήρες μόριο) – αλκαλικής φωσφατάσης προς τα AhR, HSP90, XAP2 και p23 ήταν 1:200. Ο συντελεστής αραίωσης για τα αντισώματα ποντικιού αντι-IgG (πλήρες μόριο) – αλκαλικής φωσφατάσης προς την β-ακτίνη ήταν 1:3000. Έγινε έκπλυση δύο φορές για 5 λεπτά και οι μεμβράνες εντοπίστηκαν μέσω σήμανσης με αλκαλική φωσφατάση. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό Image J (Drop of Wisdom).
2.7. Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης με αντίστροφη μεταγραφή (RT-PCR)
Το συνολικό RNA απομονώθηκε από τα κύτταρα χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy Mini Kit (Qiagen). Το συμπληρωματικό DNA του πρώτου στελέχους (cDNA) συντέθηκε από 4 μg του συνολικού RNA χρησιμοποιώντας το σύστημα Super Script III First-Strand (Invitrogen) και τα cDNA ενισχύθηκαν με τους ακόλουθους εκκινητές: CYP1A1 (μπροστά, 5’-ACCACCAAGAACTGCTTAGCC-3’; αντίστροφα, 5’-GAAGAGTGTCGGAAG-3’), β-ακτίνη (μπροστά, 5’-GCTCGTCGTCGA CAACGGCTC-3’; αντίστροφα, 5’-CAAACATGATCTGGGTCATCTTCTC-3’). β-ακτίνη (μπροστά, 5’-GCTCGTCGTCGACAACGGCTC-3’; αντίστροφα, 5’-CAAACA TGATCTGGGTCATCTTCTC-3’). Τα προϊόντα της αντίδρασης PCR διαχωρίστηκαν σε 1% πηκτή αγαρόζης και έγινε χρώση με βρωμιούχο αιθίδιο. Η αναλογία CYP1A1/β-ακτίνης υπολογίστηκε με το λογισμικό Image J (Drop of Wisdom).
Da Greco a Inglese: Liposomes General field: Medico/Sanitario Detailed field: Biologia (Biotecnologia, Biochimica, Microbiologia)
Testo originale - Greco
ΛΙΠΟΣΩΜΑΤΑ
1.1 Γενικά
Τα λιποσώματα (μικροτεμαχιδιακάλιπιδικά σωματίδια) είναι υπό εκτεταμένη έρευνα για περισσότερα από 20 χρόνια για χρήση ως φορείς βελτιωμένης μεταφοράς για ένα ευρύ φάσμα παραγόντων. Σε αυτούς περιλαμβάνονται χημειοθεραπευτικοί παράγοντες, αντιγόνα, ανοσοτροποποιητές, χηλικές ενώσεις, αιμογλοβίνη και συμπαράγοντες, λιπίδια, και γενετικό υλικό. Στόχος οποιουδήποτε συστήματος διάθεσης φαρμάκου είναι να διαμορφώσει τη φαρμακοκινητική και την ιστική κατανομή του φαρμάκου με ωφέλιμο τρόπο. Στα ποικίλα συστήματα μεταφοράς που έχουν προταθεί όλα αυτά τα χρόνια ανήκουν πολλά συστήματα-φορείς τεμαχιδίων. Για παράδειγμα, μικροσφαίρες, νανοτεμαχίδια, λιποπρωτεΐνες, μικυλλιακά συστήματα και λιποσώματα.
Tαλιποσώματα είναι ενυδατωμένες λιπιδικές διασπορές, αποτελούμενες κυρίως από φωσφολιπίδια, τα οποία σχηματίζουν διπλοστoιβάδες συγκροτώντας μακρομοριακές δομές γνωστές ως πολυστoιβαδιακά σωματίδια (MLV). Τα φωσφολιπίδια, όταν διασπαρούν σε θερμοκρασία πάνω από την θερμοκρασία μετάπτωσής τους (Τm) σε πλούσιο υδατικό περιβάλλον, σχηματίζουν αυθόρμητα σωματίδια που εγκλωβίζουν υδατικό πυρήνα.
Τα λιποσωμικά συστήματα μεταφοράς φαρμάκων έχουν γνωρίσει ευρεία ανάπτυξη με διάφορα λιποσωμικά φάρμακα να βρίσκονται σε κλινικές δοκιμές ή να κυκλοφορούν ήδη στην αγορά. Είναι γνωστό από πολυάριθμες προκλινικές και κλινικές μελέτες ότι φάρμακα, όπως τα αντικαρκινικά φάρμακα, εγκλωβισμένα σε λιποσώματα επιδεικνύουν μειωμένη τοξικότητα, ενώ διατηρούν ή εμφανίζουν ακόμα κι αυξημένη αποτελεσματικότητα. Αυτό συμβαίνει, εν μέρει, λόγω μεταβολής της φαρμακοκινητικής του φαρμάκου, η οποία οδηγεί σε συσσώρευσή του στις πάσχουσες περιοχές –όπως όγκοι- και μειωμένη διάθεση σε άλλους ευαίσθητους ιστούς.
Υπό ανάπτυξη βρίσκονται και λιποσωμικά συστήματα προάγοντα τη σύντηξη με κυτταρικές μεμβράνες (fusogenic), τα οποία έχουν την ικανότητα να μεταφέρουν φάρμακα ενδοκυττάρια, γεγονός το οποίο αναμένεται να ενισχύει σημαντικά τη θεραπευτική ικανότητα των εγκλωβισμένων σε αυτά φαρμάκων. Οι εξελίξεις στοσχεδιασμό των λιποσωμάτων οδηγούν σε νέες πιθανές υποψηφιότητες για μεταφορά βιοτεχνολογικών προϊόντων, όπως είναι ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες, αντιπληροφοριακάολιγονουκλεοτίδια και κλωνοποιημένα γονίδια.
Εικόνα 1.1: Αναπαράσταση ενός λιποσώματος σε διατομή (Avantipolarlipids)
1.2 Δομικά στοιχεία – Χαρακτηριστικά λιποσωμάτων
1.2.1 Λιπίδια
Τα λιποσώματα μπορούν να παρασκευαστούν από ποικιλία λιπιδίων και μιγμάτων λιπιδίων. Ένα από τα βασικά είδη μεμβρανικών λιπιδίων περιλαμβάνουν τα φωσφολιπίδια. Αυτά έχουν μια πολική κεφαλή και δύο υδρογονανθρακικές αλυσίδες. Υπάρχουν δύο είδη φωσφολιπιδίων: τα φωσφοδιγλυκερίδια και τα σφιγγολιπίδια, μαζί με τα αντίστοιχα προϊόντα υδρόλυσής τους. Ένα παράδειγμα φωσφολιπιδίου φαίνεται στην εικόνα 1.2. Οι υδρόφοβες ουρές έλκονται μεταξύ τους, ενώ οι υδρόφιλες κεφαλές συνδέονται με το υδατικό μέσο (υδρόφιλες αλληλεπιδράσεις, υδρόφοβη επίδραση) εξωτερικά και εσωτερικά της λιποσωμικής επιφάνειας. Με τον τρόπο αυτό σχηματίζονται διπλές λιπιδικές στιβάδες οι οποίες σφραγίζουν και δημιουργούν μικρά σωματίδια παρόμοια με τα σωματικά κύτταρα και τα οργανίδιά τους. Οι δυνάμεις που αναπτύσσονται σταθεροποιώντας τα λιποσώματα είναι οι εξής:
i. Μεταξύ των λιπιδίων αλληλεπιδράσεις, όπως: υδρόφιλες αλληλεπιδράσεις ανάμεσα στις πολικές ομάδες και αλληλεπιδράσεις VanderWaals ανάμεσα στις υδρογονανθρακικές αλυσίδες και
ii. Τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ λιπιδίων και νερού (υδρόφιλες αλληλεπιδράσεις, υδρόφοβη επίδραση).
Το ακραίο τμήμα των λιπιδίων που ξεκινά με NH3 είναι η πολική ομάδα (ή πολική κεφαλή). Συνδέεται μέσω της γλυκερόλης με δύο λιπαρές αλυσίδες. Μια από τις αλυσίδες είναι ευθεία λιπαρή αλυσίδα (κορεσμένη), ενώ η άλλη παρουσιάζει κυρτότητα λόγω cis διπλού δεσμού (μη κορεσμένη). Αυτό επηρεάζει το πακετάρισμα και την κίνηση στο πλευρικό επίπεδο της μεμβράνης.
Εικόνα 1.3: Δομή φωσφολιπιδίου και χαρακτηριστικές ομάδες
Οι αλυσίδες των λιπαρών οξέων στα φωσφολιπίδια και τα γλυκολιπίδια συνήθως περιέχουν έναν άρτιο αριθμό ατόμων άνθρακα, συνήθως μεταξύ 14 και 24. Πιο συχνά βρίσκουμε τα λιπαρά οξέα με 16 και 18 άτομα άνθρακα. Τα λιπαρά οξέα μπορεί να είναι ακόρεστα ή κορεσμένα. Το ισόμερες που ανευρίσκεται στα ακόρεστα λιπαρά είναι σχεδόν πάντα στη cis μορφή. Ένα κεκορεσμένο λιπαρό οξύ περιέχει μόνο απλούς δεσμούς ενώ τα ακόρεστα λιπαρά οξέα έχουν διπλούς δεσμούς στην υδρογονανθρακική αλυσίδα τους. Οι διπλοί δεσμοί των πολυακόρεστων λιπαρών οξέων χωρίζονται από μια τουλάχιστον μεθυλενική ομάδα. Η διαμόρφωση και ο αριθμός αυτών των διπλών δεσμών καθώς και το μήκος της αλυσίδας επιδρά στο σημείο τήξης και στα χαρακτηριστικά ρευστότητας της μεμβράνης. Τα περισσότερα φωσφολιπίδια φυσικής προέλευσης είμαι «μίγματα» επειδή τα λιπαρά οξέα που συνάπτονται στις θέσεις 1 και 2 του ίδιου μορίου συνήθως είναι διαφορετικά μεταξύ τους. Η αλυσίδα του λιπαρού οξέως στην εσωτερική θέση είναι ακόρεστη ενώ της εξωτερικής θέσης είναι κεκορεσμένη και μεγαλύτερου μήκους όσο αφορά τον αριθμό των ατόμων άνθρακα.
1.2.2 Θερμοκρασία μετάπτωσης φάσης (Phasetransition -Tm)
Oι μεμβράνες από φωσφατιδυλχολίνες υφίστανται σε διαφορετικές φάσεις όταν ευρίσκονται σε διαφορετικές θερμοκρασίες. Η μετάβαση από τη μία φάση στην άλλη μπορεί να διαπιστωθεί με φυσικές μεθόδους κατά την αύξηση της θερμοκρασίας. Η πλέον διαδεδομένη τεχνική για τον προσδιορισμό της θερμοκρασίας μετάπτωσης είναι η θερμιδομετρία ( Huang C. etal., 1999).
Οι πιο συχνά παρατηρούμενες αλλαγές φάσης συμβαίνουν στην υψηλότερη θερμοκρασία, στην οποία η μεμβράνη αποδιατάσσεται από την οργανωμένη μορφή της γέλης (gel) ή του στερεού (solid) και μεταβαίνει σε υγρή - κρυσταλλική δομή κατά την οποία οι βαθμοί ελευθερίας των μορίων είναι περισσότεροι. Γενικά αύξηση του μήκους της λιπαρής αλυσίδας ή αύξηση του κορεσμού της αλυσίδας αυξάνει την Tm.
Η θερμοκρασία μετάπτωσης για τα φωσφολιπίδια που προέρχονται από το κρόκο αυγού ποικίλλει μεταξύ -15°C ( υψηλό βαθμό ακορεστότητας) και πάνω από 50°C για πλήρη κεκορεσμένα φωσφολιπίδια όπως είναι η διστεαροϋλογλυκεροφωσφατιδυλοχολίνη (DSPC).
Traduzione - Inglese LIPOSOMES
1.1 Introduction
Liposomes (small lipid vesicles) have been studied extensively for more than 20 years in order to be used as improved vehicles for a wide range of agents. Such agents include chemotherapeutic agents, antigens, immunomodulators, chelates, hemoglobin and cofactors, lipids and genetic material. The goal of any drug delivery system is to create an effective pharmacokinetic and tissue distribution. The various systems put forward during all this time include a lot of systems that make use of vesicles. These vesicles can be microspheres, nanoparticles, lipoproteins, micellar systems and liposomes.
Liposomes are hydrated lipid dispersions, consisting mainly of phospholipids, which form lipid bilayers by taking the shape of macromolecular structures known as multilamellar vesicles (MLV). When phospholipids are dispersed in temperatures exceeding their transition temperature (Tm) in a rich aqueous environment, they spontaneously form vesicles that contain an aqueous core.
Liposome-based drug delivery systems have been widely developed and various liposome drugs are being clinically tested or are already available in the market. Numerous preclinical and clinical studies have shown that drugs, such as anticancer medicines, have reduced toxicity while maintaining or even increasing their efficacy when contained in liposomes. This is partly due to an alteration of the pharmacokinetics of the drug, which causes it to accumulate more in affected areas like tumors and less in other sensitive tissues.
Liposome systems that utilize cell membrane fusion (fusogenic liposomes) are also under development, which can deliver drugs intercellularly; this is expected to significantly improve the efficacy of the medicine contained therein. The developments in liposome design lead to new possible candidates for the delivery of biotechnological products, such as recombinant proteins, antisense oligonucleotides and
cloned genes.
Image 1.1: Α liposome in cross-section (Avantipolarlipids)
1.2 Liposome Structural elements - Characteristics
1.2.1 Lipids
Liposomes can be made out of a variety of lipids and lipid mixtures. One of the basic types of membrane lipids include phospholipids. Phospholipids consist of a polar head and two hydrocarbon chains. There are two types of phospholipids: glycerophospholipids and sphingolipids, as well as their respective hydrolysates. Image 1.2. shows an example of a phospholipid. The hydrophobic “tails” attract each other, whereas the hydrophilic “heads” bind to the aqueous medium (hydrophilic interactions, hydrophobic effect) internally and externally of the liposome’s surface. Lipid bilayers are thus formed, which are sealed and create small vesicles similar to the somatic cells and their organelles. The developing forces that stabilize the liposomes are:
i. Interactions between the lipids, such as: hydrophilic interactions between the polar molecules and Van der Waals interactions between the hydrocarbon chains and
ii. Interactions between the lipids and the water (hydrophilic interactions, hydrophobic effect). The outermost part of the lipids that starts with NH3 is the polar or hydrophilic end. It is connected to two lipid chains through glycerol. One of these chains is a linear lipid chain (saturated), while the other is curved due to a cis double bond (unsaturated). This affects the agreggation and movement in the lateral plane of the membrane.
Image 1.3: Structure and functional groups of a phospholipid
The fatty acid chains in phospholipids and glycolipids usually contain an even number of carbon atoms, usually between 14 and 24. More often, fatty acids have 16 and 18 carbon atoms. Fatty acids can be saturated or unsaturated. The isomer found in unsaturated fats is almost always in cis form. A saturated fatty acid only contains single bonds, whereas the unsaturated fatty acids have double bonds in their hydrocarbon chain. The double bonds in polyunsaturated fatty acids are separated by at least one methylene bridge. The formation and number of these double bonds, as well as the length of the chain affect the melting point and the membrane fluidity characteristics. Most phospholipids found in nature are ”mixtures”, because the fatty acids holding the positions 1 and 2 of the same molecule are usually different. The fatty acid chain in the inner position is unsaturated, whereas the one in the outer position is saturated and longer with regards to the number of carbon atoms.
1.2.2 Phase Transition Temperature (Tm)
Phosphatidylcholine membranes undergo different phases in different temperatures. The transition from one phase to another can be observed with physical methods during an increase in temperature. The most common technique for measuring the transition temperature is calorimetry (Huang C. et al., 1999).
The most commonly observed phase transitions happen at the highest temperature, when the membrane denaturates from its organised gel or solid form and transitions to a liquid – crystalline structure, where the molecules can move more freely. Generally, an increase of the lipid chain length or its saturation increases the Tm.
The transition temperatures for egg yolk phospholipids varies between -15°C (high degree of unsaturation) and over 50°C for fully saturated phospholipids like distearoylphosphatidylcholine (DSPC).
More
Less
Titoli di studio per la traduzione
Bachelor's degree - Ionian University
Esperienza
Anni di esperienza: 6 Registrato in ProZ.com: Apr 2018.
Da Inglese a Greco (Ionian University, Department of Foreign Languages, Translation & Interpreting, verified) Da Francese a Greco (Ionian University, Department of Foreign Languages, Translation & Interpreting, verified) Da Greco a Inglese (Ionian University, Department of Foreign Languages, Translation & Interpreting, verified) Da Greco a Francese (Ionian University, Department of Foreign Languages, Translation & Interpreting, verified)
Associazioni
N/A
Software
Adobe Photoshop, Aegisub, MemSource Cloud, Microsoft Word, Protemos, Smartcat
I am a trained native Greek translator specializing in legal, financial and business translations to and from Greek, English and French.
My work experience involves PoAs, contracts, criminal records, lawsuits, terms & conditions, marriage & divorce documents, e-mails & communications, blog articles, fiscal declarations, management reports, balance sheets etc.
I also have experience with medical projects (blood tests, other medical examinations), as well as general translation documents (degrees, certifications, permits, declarations).
I am a member of the Panhellenic Association of Translators of the Ionian University (PEEMPIP).
I currently work as a freelance journalist/ translator focusing on articles related to the industries of banking, finance and shipping in Greece.
Questo membro ha acquisito punti KudoZ aiutando altri colleghi nella traduzione di termini di livello PRO. Cliccare sui punteggi per visualizzare le proposte di traduzione suggerite.
Esperienza